Carnivorele sălbatice din Olanda indică o expunere mai mare la virusurile West Nile și Usutu
RNA viral și anticorpi găsiți în vulpi, nevăstuici, un dihor și o ferăstrău olandeză dezvăluie o expunere extinsă, lăsând însă neclar rolul carnivorelor în transmiterea acestor virusuri.
O cercetare recent publicată în jurnalul npj Viruses a evaluat dovezile moleculare și serologice ale expunerii la virusul West Nile (WNV) și virusul Usutu (USUV) în carnivore sălbatice din Olanda.
În fiecare an, virusurile transmise de țânțari circulă printre animale sălbatice, creând oportunități pentru răspândirea infecțiilor între diferite specii. WNV și USUV infectează în principal păsările, care constituie rezervoarele și gazdele amplificatoare ale virusurilor, în timp ce țânțarii le transmit între gazde.
Oamenii și majoritatea mamiferelor sunt considerați în general gazde fără continuitate, deoarece nu dezvoltă niveluri virale suficiente pentru a susține transmiterea. Cu toate acestea, studii anterioare au arătat dovezi ale prezenței virusurilor sau ale anticorpilor în mai multe specii de mamifere sălbatice, indicând că aceste specii sunt expuse și pot avea un rol în ecologia virusurilor.
Cercetătorii din Olanda au examinat probele provenite de la carnivore sălbatice între anii 2020 și 2023. Animalele, care au fost trimise către Centrul de Sănătate a Faunei Sălbatice din Olanda după deces, au fost supuse necropsiei, iar probele au fost obținute din speciile aparținând familiilor Canidae, Mustelidae și Procyonidae.
Probele de sânge, țesut, tampoane și fecale au fost colectate și stocate în condiții de laborator adecvate înainte de analiză. Aceste probe au provenit de la animale găsite moarte, euthanizate, de la cele care au murit în centre de recuperare sau de la nevăstuici aparent sănătoase, culese în cadrul unui program de conservare a păsărilor cuibăritoare la sol.
Acidul nucleic total a fost extras și analizat prin reacția de polimerizare în lanț cu transcriptază inversă (RT-PCR) pentru a detecta RNA-ul WNV și USUV. Au fost realizate secvențieri complete ale genomului, urmate de analize filogenetice asupra probelor pozitive selectate pentru a identifica tulpinile virale și relațiile lor filogenetice.
Probe de sânge întreg au fost examinate pentru anticorpi utilizând un microarray proteic, iar probele reactive cu volum suficient au fost ulterior testate prin testul de neutralizare a focarului de 90% (FRNT90) pentru a identifica anticorpii neutralizanți specifici pentru virus.
Rezultatele studiului au arătat că cercetătorii au examinat 818 carnivore sălbatice din Olanda între anii 2020 și 2023 pentru prezența WNV și USUV. Probele au reprezentat multiple specii, cu nevăstuici constituind majoritatea animalelor testate. Au fost analizate tampoane orofaringiene și rectale, probe de plămâni, creier și fecale pentru RNA viral, iar probe de sânge întreg de la 413 animale pentru anticorpi.
Testele moleculare au detectat RNA-ul USUV în nouă dintre cele 818 animale testate. Animalele pozitive au inclus o nevăstuică, un dihor euroasiatic, o vulpe roșie și șase nevăstuici, toate fiind prelevate între 2020 și 2022, dar nici o probă nu a fost pozitivă pentru RNA-ul WNV.
Dintre animalele pozitive pentru RNA-ul USUV, RNA-ul viral a fost detectat în principal în tampoanele orofaringiene și rectale, cu rezultate pozitive mai puține în probele de plămâni, creier și fecale. Niciuna dintre carnivorele testate în 2023 nu a arătat dovezi moleculare ale vreunui virus.
Mai multe detectări ale RNA-ului USUV au avut loc în timpul iernii sau la începutul primăverii, sugerând posibilitatea expunerii prin prădare sau curățare atunci când activitatea țânțarilor era scăzută, deși studiul nu a testat această cale de transmitere.
Secvențierea bazată pe amplicon a generat secvențe genomice parțiale USUV din dihorul euroasiatic și vulpea roșie, împreună cu o secvență parțială NS5 din nevăstuică. Analiza filogenetică a clasificat virusul din dihor în cadrul liniei Europa 3, în timp ce virusurile detectate în nevăstuică și vulpe roșie aparțineau liniei Africa 3. Aceste secvențe s-au grupat strâns cu secvențele virale detectate anterior în păsări și țânțari din Olanda, fiind consistente cu o contaminare localizată în carnivore din ciclurile de transmisie stabilite păsări-țânțari.
Testele serologice au identificat mai multe cazuri de expunere la virus decât testele moleculare. Toate cele 413 probe de sânge întreg au fost inițial examinate folosind microarray-ul proteic, iar 53 au fost reactive pentru anticorpi care se leagă de WNV NS1, USUV NS1 sau ambele antigene.
Dintre aceste probe reactive, 20 au avut volum insuficient pentru testarea FRNT90, lăsând 33 disponibile pentru testarea de confirmare, care a identificat anticorpi neutralizanți în 25 de animale. Anticorpii neutralizanți împotriva USUV au fost detectați în șase carnivore, în timp ce opt animale au purtat anticorpi neutralizanți împotriva WNV.
Acești anticorpi au fost identificați exclusiv în vulpi roșii și nevăstuici. Alte 11 probe au conținut anticorpi neutralizanți flavivirus care nu au putut fi distinși în mod definitiv ca fiind WNV sau USUV, deoarece titrurile anticorpilor au diferit cu mai puțin de 4 ori sau volumul probei a fost insuficient pentru testarea completă.
Anticorpii pentru unul sau ambele virusuri au fost detectați în multiple provincii din Olanda, cu anticorpi USUV identificați între 2020 și 2022 și anticorpi WNV detectați între 2021 și 2023.
Concluziile studiului au arătat că carnivorele sălbatice din Olanda sunt expuse atât la WNV, cât și la USUV, cu RNA-ul USUV detectat în mai multe specii, iar testele serologice identificând expunerea la ambele virusuri în vulpi roșii și nevăstuici. Secvențele virale parțiale erau strâns legate de tulpinile descoperite anterior în păsările și țânțarii din Olanda, fiind în concordanță cu o contaminare localizată din virusuri care circulă în cicluri stabilite păsări-țânțari.
Deoarece studiul nu a măsurat viremia, nu a izolat virusul viabil și nu a evaluat dacă animalele ar putea infecta țânțarii, nu a putut determina dacă carnivorele contribuie la transmiterea, menținerea sau supraviețuirea virusurilor. Totuși, specii răspândite precum vulpile roșii și nevăstuicile ar putea oferi informații suplimentare de tip sentinel pentru monitorizarea activității arbovirusurilor.
Este nevoie de cercetări suplimentare pentru a clarifica modul în care mamiferele sălbatice contribuie la ecologia și dinamica de transmitere a acestor virusuri.
