Nouă gazdă identificată pentru blocarea virusului hepatitei E
Virusul hepatitei E (HEV) este o cauză majoră a hepatitei virale acute, iar tratamentele antivirale disponibile sunt în mare parte limitate la utilizarea off-label a ribavirinei.
Ribavirina poate provoca toxicitate semnificativă, este contraindicată în timpul sarcinii și nu aduce beneficii fiabile tuturor pacienților. În căutarea unor tratamente alternative, Ring și colaboratorii au testat compuși care interferă cu căile endocitice și endolizozomale, sistemul de transport intracelular utilizat de HEV pentru a pătrunde în celule.
Printre compușii testați, apilimod s-a dovedit a fi inhibitorul cel mai puternic. Apilimod vizează PIKfyve, o kinază fosfoinozită care reglează organizarea endozomilor tardivi și a lizozomilor. Apilimod, raloxifene, verapamil, clorochină și tamoxifen au inhibat infecția cu HEV în funcție de doză, dar apilimod a demonstrat cea mai puternică activitate, atingând o potență nanomolară în celulele HepG2/C3A.
PIKfyve este esențial pentru pătrunderea virală. Cercetătorii au confirmat că efectul antiviral a fost legat de PIKfyve și nu de o acțiune nelegată a apilimodului. Silențierea PIKfyve folosind ARN mic de interferență a redus infecția cu HEV cu aproximativ 40%, iar alți doi inhibitori PIKfyve, YM201636 și APY0201, au, de asemenea, suprimat infecția.
Acest efect a fost observat atât împotriva particulelor virale quasi-envelopate, cât și non-envelopate, precum și împotriva diferitelor tulpini HEV, ceea ce sugerează că dependența de PIKfyve poate fi o caracteristică conservată a infecției HEV.
Experimentele de tip time-of-addition și replicon au identificat etapa afectată a ciclului de viață viral. Inhibitorii PIKfyve au rămas eficienți când au fost administrați în primele ore după inocularea virală, dar nu au inhibat replicarea ARN-ului HEV atunci când pătrunderea celulară a fost ocolită experimental. Prin urmare, apilimod acționează în principal ca un inhibitor al pătrunderii, mai degrabă decât să vizeze direct mecanismele de replicare virală.
Experimentele mecanistice au arătat că inhibarea PIKfyve a mărit lizozomii, a redus compartimentele pozitive pentru LAMP1 și CD63 și a afectat livrarea genomurilor HEV incoming către veziculele endozomale tardive și lizozomale.
Apilimod a redus, de asemenea, maturarea și activitatea cathepsinelor B și L. Acești proteaze lizozomali sunt considerați responsabili pentru procesarea capsidului HEV și pentru facilitarea eliberării genomului viral în citoplasmă. Studiul conectează astfel organizarea veziculară controlată de PIKfyve cu decapsidarea virală dependentă de proteaze, oferind o explicație mecanistică coerentă pentru blocarea pătrunderii HEV.
Importanța studiului este subliniată de faptul că apilimod a redus infecția cu HEV în hepatocitele umane primare, fără a afecta viabilitatea celulară, deși concentrațiile eficiente au fost mai mari decât cele necesare în liniile celulare de hepatom.
Compusul a fost, de asemenea, testat pe șobolani infectați cu ratHEV. Animalele au primit apilimod la 75 mg/kg o dată pe zi timp de 12 zile. Tratamentul a modificat semnificativ traiectoria eliminării virale fecale și a redus nivelurile de ARN viral în mai multe țesuturi analizate. Totuși, reducerea în ansamblu a încărcăturii virale fecale nu a atins semnificația statistică convențională, subliniind natura preliminară a dovezilor in vivo.
Acest studiu poziționează PIKfyve ca un factor de dependență de gazdă care poate fi țintit pentru HEV și ridică posibilitatea reutilizării apilimodului, care a fost anterior testat clinic pentru alte indicații. Țintirea unei căi gazdă poate impune, de asemenea, o barieră mai mare la rezistența virală decât terapiile direcționate împotriva unei proteine virale.
Cu toate acestea, descoperirile rămân preclinice. Infecția cu ratHEV nu reproduce complet boala umană cauzată de HEV, iar PIKfyve are funcții fiziologice importante în homeostazia endolizozomală. Studii viitoare ar trebui să stabilească expunerea terapeutică adecvată, momentul tratamentului, toxicitatea specifică țesuturilor, activitatea împotriva genotipurilor suplimentare de HEV uman și eficacitatea în infecțiile cronice sau stabilite. Dezvoltarea clinică va necesita, în final, dovezi că concentrațiile antivirale pot fi realizate în siguranță la pacienți.
